2 × Taq Plus PCR Mix

Ultra čista Taq DNK polimeraza visoke efikasnosti i visoke vjernosti.

Taq Plus DNA polimeraza je mješavina Taq i Pfu DNA polimeraze. Ima 5'-3 'egzonukleaznu aktivnost i 3'-5' egzonukleaznu aktivnost, sa karakteristikama visoke efikasnosti pojačanja i niske stope neusklađenosti. U usporedbi s Taq DNA polimerazom, Taq Plus DNA polimeraza ima prednosti povećane dužine amplifikacije (jednostavni predlošci mogu se efikasno pojačati do 20 kb, a složeni do 10 kb), dobre vjernosti itd. U usporedbi s Pfu DNA polimerazom, ima prednosti velike brzine pojačanja i visoke efikasnosti reakcije.

Cat. Ne Veličina pakovanja
4992791 1ml
4992792 5*1 ml
4992793 5 × 1 ml

Detalji o proizvodu

Eksperimentalni primjer

FAQ

Oznake proizvoda

Definicija aktivnosti

1 Jedinica (U) Taq Plus DNA Polimerazna aktivnost definirana je kao količina enzima potrebna za ugradnju 10 nmol deoksinukleotida u tvari netopive u kiselini na 74 ° C u roku od 30 minuta koristeći aktiviranu DNK sperme lososa kao šablon/prajmer.

Kontrola kvaliteta

Čistoća pomoću SDS-PAGE detekcije je veća od 99%; Nije otkrivena aktivnost egzogene nukleaze; Gen sa jednom kopijom u ljudskom genomu mogao bi se efikasno pojačati; Nema značajnih promjena aktivnosti ako se čuvaju na sobnoj temperaturi jednu sedmicu.

Glavni tehnički parametri

Taq Plus DNA polimeraza ima 5′-3 ′ egzonukleaznu aktivnost i 3′-5 ′ egzonukleaznu aktivnost. PCR proizvodi se mogu direktno klonirati u TA vektor. Ako je potrebno poboljšati učinkovitost kloniranja, preporučuje se prvo pročistiti PCR proizvode i izvršiti A-tailing prije kloniranja u TA vektor.

Taq Plus PCR mix s jednom cijevi (Nacionalna certifikacija proizvoda visoke tehnologije)

■ Taq Plus PCR Mix poboljšao je specifičnost i osjetljivost PCR reakcije i može pojačati složene šablone sa visokim sadržajem GC -a, sekundarnom strukturom i slično. Mogu se pojačati samo 2 kopije ciljnog predloška, ​​osiguravajući preciznije eksperimentalne rezultate.

■ Jedinstvena Taq Plus PCR Mix formula čini cijeli reakcijski sistem vrlo stabilnim, a na aktivnost neće utjecati ponavljano zamrzavanje-odmrzavanje ili dugotrajno skladištenje na 4 ° C.

■ Stabilno i efikasno unaprijed pripremljeno rješenje za PCR mješavinu može učiniti rad brzim i jednostavnim, uvelike smanjujući intenzitet rada i grešku uzorkovanja. PCR pojačivač i optimizator visokih performansi takođe su uključeni u mešavinu, što smanjuje zahteve u pogledu PCR uslova.

■ Ovaj proizvod ima sisteme koji sadrže boje i boje. Proizvodi PCR Mix koji sadrže boju mogu se direktno elektroforezirati nakon PCR-a, bez dodavanja pufera za uzorke.

Aplikacije

Obično se koristi za pojačavanje predložaka visoke vjernosti i složene strukture, poput visokog sadržaja GC -a i sekundarne strukture. U većini slučajeva može zamijeniti Taq DNA polimerazu.

Svi proizvodi se mogu prilagoditi za ODM/OEM. Za detalje,kliknite Prilagođena usluga (ODM/OEM)


  • Prethodno:
  • Sljedeći:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Experimental Example Koristite genomsku DNK kao predložak za amplifikaciju 1 kb fragmenta.
    Nakon PCR reakcije, uzmite 5 μl za detekciju elektroforeze.
    P: Nema pojaseva pojačanja

    A-1 Template

    ■ Predložak sadrži proteinske nečistoće ili inhibitore Taq, itd. - Očistite predložak DNK, uklonite proteinske nečistoće ili izvadite DNK šablona kompletima za pročišćavanje.

    ■ Denaturacija šablona nije potpuna —— Odgovarajuće povećati temperaturu denaturacije i produžiti vreme denaturacije.

    ■ Degradacija predloška ——Ponovo pripremite predložak.

    A-2 Primer

    ■ Loš kvalitet prajmera —— Ponovo sintetizujte prajmer.

    ■ Razgradnja prajmera —— Raspodijelite prajmere velike koncentracije u mali volumen radi očuvanja. Izbjegavajte višestruko zamrzavanje i odmrzavanje ili dugotrajno krio konzerviranje na 4 ° C.

    ■ Nepravilno oblikovanje prajmera (npr. Dužina prajmera nije dovoljna, dimer formiran između prajmera itd.) -Preizmenjivanje prajmera (izbegavanje stvaranja dimera prajmera i sekundarne strukture)

    A-3 Mg2+koncentracija

    ■ Mg2+ koncentracija je preniska —— Pravilno povećajte Mg2+ koncentracija: Optimizirajte Mg2+ koncentracija nizom reakcija od 1 mM do 3 mM sa intervalom od 0,5 mM za određivanje optimalnog Mg2+ koncentracija za svaki predložak i temeljni premaz.

    A-4 Temperatura žarenja

    ■ Visoka temperatura žarenja utiče na vezivanje temeljnog premaza i šablona. ——Smanjite temperaturu žarenja i optimizirajte stanje s gradijentom od 2 ° C.

    A-5 Vreme produženja

    ■ Kratko vreme produženja —— Produžite vreme produženja.

    P: Lažno pozitivan

    Fenomeni: Negativni uzorci također pokazuju trake ciljnih sekvenci.

    A-1 Kontaminacija PCR-om

    ■ Ukrštena kontaminacija ciljane sekvence ili produkata amplifikacije —— Pažljivo ne pipetirajte uzorak koji sadrži ciljnu sekvencu u negativnom uzorku ili ih prosipajte iz epruvete za centrifugu. Reagense ili opremu treba autoklavirati kako bi se uklonile postojeće nukleinske kiseline, a postojanje kontaminacije treba utvrditi eksperimentima s negativnom kontrolom.

    ■ Kontaminacija reagensa —— Rasporedite reagense i čuvajte na niskoj temperaturi.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ koncentracija je preniska —— Pravilno povećajte Mg2+ koncentracija: Optimizirajte Mg2+ koncentracija nizom reakcija od 1 mM do 3 mM sa intervalom od 0,5 mM za određivanje optimalnog Mg2+ koncentracija za svaki predložak i temeljni premaz.

    ■ Nepravilan dizajn prajmera, a ciljna sekvenca ima homologiju sa sekvencom bez cilja. —— Premazi za ponovni dizajn.

    P: Nespecifično pojačanje

    Fenomeni: PCR amplifikacijske trake nisu u skladu s očekivanom veličinom, bilo velike ili male, ili se ponekad javljaju i specifične pojačane pojaseve i nespecifične pojačane pojaseve.

    A-1 Primer

    ■ Loša specifičnost prajmera

    —— Premaz za ponovno oblikovanje.

    ■ Koncentracija prajmera je previsoka —— Pravilno povećajte temperaturu denaturacije i produžite vrijeme denaturacije.

    A-2 Mg2+ koncentracija

    ■ Mg2+ koncentracija je previsoka —— Pravilno smanjite koncentraciju Mg2+: Optimizirajte Mg2+ koncentracija nizom reakcija od 1 mM do 3 mM sa intervalom od 0,5 mM za određivanje optimalnog Mg2+ koncentracija za svaki predložak i temeljni premaz.

    A-3 Termostabilna polimeraza

    ■ Prekomjerna količina enzima —— Smanjite količinu enzima na odgovarajući način u intervalima od 0,5 U.

    A-4 Temperatura žarenja

    ■ Temperatura žarenja je preniska —— Odgovarajuće povećajte temperaturu žarenja ili usvojite dvostepenu metodu žarenja

    A-5 PCR ciklusi

    ■ Previše PCR ciklusa —— Smanjite broj PCR ciklusa.

    P: Zakrpljene ili razmazane trake

    A-1 Primer—— Loša specifičnost ——Projektirajte temeljni premaz, promijenite položaj i dužinu prajmera kako biste poboljšali njegovu specifičnost; ili izvršite ugniježđenu PCR.

    A-2 DNK šablona

    —— Predložak nije čist—— Očistite predložak ili izvucite DNK setovima za pročišćavanje.

    A-3 Mg2+ koncentracija

    ——Mg2+ koncentracija je previsoka —— Pravilno smanjite Mg2+ koncentracija: Optimizirajte Mg2+ koncentracija nizom reakcija od 1 mM do 3 mM sa intervalom od 0,5 mM za određivanje optimalnog Mg2+ koncentracija za svaki predložak i temeljni premaz.

    A-4 dNTP

    —— Koncentracija dNTP -a je previsoka —— Smanjite koncentraciju dNTP -a na odgovarajući način

    A-5 Temperatura žarenja

    —— Preniska temperatura žarenja —— Odgovarajuće povećajte temperaturu žarenja

    A-6 Ciklusi

    —— Previše ciklusa ——Optimizirajte broj ciklusa

    P: Koliko DNK uzorka treba dodati u 50 μl PCR reakcijski sistem?
    ytry
    P: Kako pojačati dugačke fragmente?

    Prvi korak je odabir odgovarajuće polimeraze. Obična Taq polimeraza ne može se lektorisati zbog nedostatka 3'-5 'egzonukleazne aktivnosti, a neusklađenost će u velikoj mjeri smanjiti efikasnost produženja fragmenata. Stoga, obična Taq polimeraza ne može učinkovito pojačati ciljane fragmente veće od 5 kb. Taq polimerazu sa posebnom modifikacijom ili drugu polimerazu visoke vjernosti treba odabrati kako bi se poboljšala efikasnost produženja i zadovoljile potrebe pojačanja s dugim fragmentima. Osim toga, pojačavanje dugih fragmenata također zahtijeva odgovarajuće prilagođavanje dizajna prajmera, vrijeme denaturacije, vrijeme produženja, pH pufera itd. Obično prajmeri sa 18-24 bp mogu dovesti do boljeg prinosa. Kako bi se spriječilo oštećenje šablona, ​​vrijeme denaturacije na 94 ° C treba smanjiti na 30 sekundi ili manje po ciklusu, a vrijeme za povećanje temperature na 94 ° C prije pojačanja treba biti manje od 1 minute. Štaviše, postavljanje ekstenzijske temperature na oko 68 ° C i dizajniranje produžetnog vremena prema brzini od 1 kb/min može osigurati efikasno pojačavanje dugih fragmenata.

    P: Kako poboljšati vjernost amplifikacije PCR -a?

    Stopa grešaka amplifikacije PCR -a može se smanjiti upotrebom različitih DNA polimeraza visoke vjernosti. Među svim do sada pronađenim Taq DNK polimerazama, Pfu enzim ima najmanju stopu grešaka i najveću vjernost (vidi priloženu tabelu). Osim odabira enzima, istraživači mogu dodatno smanjiti brzinu mutacije PCR -a optimiziranjem reakcijskih uvjeta, uključujući optimiziranje sastava pufera, koncentraciju termostabilne polimeraze i optimiziranje broja ciklusa PCR -a.

    Ovdje napišite svoju poruku i pošaljite nam je