Multi PCR komplet

Izuzetno visoka aktivnost i visoka specifičnost Taq DNA polimeraze.

Multi PCR Kit je proizvod posebno razvijen za multipleks PCR. Multi HotStart DNA polimeraza sadržana u kompletu je kemijski modificirana i najbolja je HotStart polimeraza do sada pronađena. Izum omogućava da više parova PCR prajmera izvrši dobru amplifikaciju u istom reakcionom sistemu, a multipleksne PCR reakcije mogu biti izvedene osetljivo.

Cat. Ne Veličina pakovanja
4992787 5 U × 50 rxn
4992788 5 U × 50 rxn

Detalji o proizvodu

Eksperimentalni primjeri

FAQ

Oznake proizvoda

Karakteristike

■ Visoka specifičnost: Hemijski modificirani enzim za vrući start s vremenom aktivacije do 15 minuta kako bi se osiguralo pojačanje visoke specifičnosti.
■ Visoka osjetljivost: Malo pojačanje kopije i visoko efikasno pojačanje multipleks PCR -a.
■ Jednostavan rad: Enzim je neaktivan na niskim temperaturama i na sobnoj temperaturi, a reagens se može pripremiti na sobnoj temperaturi.

Definicija aktivnosti

1 jedinica (U) HotStart Taq DNA Aktivnost polimeraze definirana je kao količina enzima potrebna za ugradnju 10 nmol deoksinukleotida u tvari netopive u kiselini na 74 ° C u roku od 30 minuta koristeći aktiviranu DNK sperme lososa kao predložak/prajmer.

Glavni tehnički parametri

Ima 5′-3 ′ egzonukleaznu aktivnost i nema 3′-5 ′ egzonukleaznu aktivnost sa najjačom specifičnošću. 3 ′ kraj PCR proizvoda je A, koji se može direktno koristiti za kloniranje TA.

Specifikacija

Tip: Hemijski modificirana HotStart DNA polimeraza
Primjene: Multiplex PCR eksperiment, eksperiment otkrivanja visoke specifičnosti, amplifikacija gena sa niskom kopijom, PCR amplifikacija šablona sa kompleksnim strukturama (kao što su genomska DNK, cDNA, itd.).

Svi proizvodi se mogu prilagoditi za ODM/OEM. Za detalje,kliknite Prilagođena usluga (ODM/OEM)


  • Prethodno:
  • Sljedeći:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Experimental Example Koristite ljudski genom kao predložak za pojačavanje 7 različitih fragmenata (100 bp-1000 bp)
    Bilješka:
    Određivanje produžetka za amplifikaciju različitih dužina u multipleks PCR -u: Za fragmente manje od 500 bp, produžite za 60 sekundi; Za fragmente od 500-1500 bp, produžite 90 sekundi; Za fragmente veće od 2000 bp produžite za 120 sec.
    ② Za vrući start potrebno je zagrijavanje na 95 ° C 15 minuta kako bi se osiguralo dovoljno oslobađanje aktivnosti enzima.
    P: Nema pojaseva pojačanja

    A-1 Template

    ■ Predložak sadrži proteinske nečistoće ili inhibitore Taq, itd. - Očistite predložak DNK, uklonite proteinske nečistoće ili izvadite DNK šablona kompletima za pročišćavanje.

    ■ Denaturacija šablona nije potpuna —— Odgovarajuće povećati temperaturu denaturacije i produžiti vreme denaturacije.

    ■ Degradacija predloška ——Ponovo pripremite predložak.

    A-2 Primer

    ■ Loš kvalitet prajmera —— Ponovo sintetizujte prajmer.

    ■ Razgradnja prajmera —— Raspodijelite prajmere velike koncentracije u mali volumen radi očuvanja. Izbjegavajte višestruko zamrzavanje i odmrzavanje ili dugotrajno krio konzerviranje na 4 ° C.

    ■ Nepravilno oblikovanje prajmera (npr. Dužina prajmera nije dovoljna, dimer formiran između prajmera itd.) -Preizmenjivanje prajmera (izbegavanje stvaranja dimera prajmera i sekundarne strukture)

    A-3 Mg2+koncentracija

    ■ Mg2+ koncentracija je preniska —— Pravilno povećajte Mg2+ koncentracija: Optimizirajte Mg2+ koncentracija nizom reakcija od 1 mM do 3 mM sa intervalom od 0,5 mM za određivanje optimalnog Mg2+ koncentracija za svaki predložak i temeljni premaz.

    A-4 Temperatura žarenja

    ■ Visoka temperatura žarenja utiče na vezivanje temeljnog premaza i šablona. ——Smanjite temperaturu žarenja i optimizirajte stanje s gradijentom od 2 ° C.

    A-5 Vreme produženja

    ■ Kratko vreme produženja —— Produžite vreme produženja.

    P: Lažno pozitivan

    Fenomeni: Negativni uzorci također pokazuju trake ciljnih sekvenci.

    A-1 Kontaminacija PCR-om

    ■ Ukrštena kontaminacija ciljane sekvence ili produkata amplifikacije —— Pažljivo ne pipetirajte uzorak koji sadrži ciljnu sekvencu u negativnom uzorku ili ih prosipajte iz epruvete za centrifugu. Reagense ili opremu treba autoklavirati kako bi se uklonile postojeće nukleinske kiseline, a postojanje kontaminacije treba utvrditi eksperimentima s negativnom kontrolom.

    ■ Kontaminacija reagensa —— Rasporedite reagense i čuvajte na niskoj temperaturi.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ koncentracija je preniska —— Pravilno povećajte Mg2+ koncentracija: Optimizirajte Mg2+ koncentracija nizom reakcija od 1 mM do 3 mM sa intervalom od 0,5 mM za određivanje optimalnog Mg2+ koncentracija za svaki predložak i temeljni premaz.

    ■ Nepravilan dizajn prajmera, a ciljna sekvenca ima homologiju sa sekvencom bez cilja. —— Premazi za ponovni dizajn.

    P: Nespecifično pojačanje

    Fenomeni: PCR amplifikacijske trake nisu u skladu s očekivanom veličinom, bilo velike ili male, ili se ponekad javljaju i specifične pojačane pojaseve i nespecifične pojačane pojaseve.

    A-1 Primer

    ■ Loša specifičnost prajmera

    —— Premaz za ponovno oblikovanje.

    ■ Koncentracija prajmera je previsoka —— Pravilno povećajte temperaturu denaturacije i produžite vrijeme denaturacije.

    A-2 Mg2+ koncentracija

    ■ Mg2+ koncentracija je previsoka —— Pravilno smanjite koncentraciju Mg2+: Optimizirajte Mg2+ koncentracija nizom reakcija od 1 mM do 3 mM sa intervalom od 0,5 mM za određivanje optimalnog Mg2+ koncentracija za svaki predložak i temeljni premaz.

    A-3 Termostabilna polimeraza

    ■ Prekomjerna količina enzima —— Smanjite količinu enzima na odgovarajući način u intervalima od 0,5 U.

    A-4 Temperatura žarenja

    ■ Temperatura žarenja je preniska —— Odgovarajuće povećajte temperaturu žarenja ili usvojite dvostepenu metodu žarenja

    A-5 PCR ciklusi

    ■ Previše PCR ciklusa —— Smanjite broj PCR ciklusa.

    P: Zakrpljene ili razmazane trake

    A-1 Primer—— Loša specifičnost ——Projektirajte temeljni premaz, promijenite položaj i dužinu prajmera kako biste poboljšali njegovu specifičnost; ili izvršite ugniježđenu PCR.

    A-2 DNK šablona

    —— Predložak nije čist—— Očistite predložak ili izvucite DNK setovima za pročišćavanje.

    A-3 Mg2+ koncentracija

    ——Mg2+ koncentracija je previsoka —— Pravilno smanjite Mg2+ koncentracija: Optimizirajte Mg2+ koncentracija nizom reakcija od 1 mM do 3 mM sa intervalom od 0,5 mM za određivanje optimalnog Mg2+ koncentracija za svaki predložak i temeljni premaz.

    A-4 dNTP

    —— Koncentracija dNTP -a je previsoka —— Smanjite koncentraciju dNTP -a na odgovarajući način

    A-5 Temperatura žarenja

    —— Preniska temperatura žarenja —— Odgovarajuće povećajte temperaturu žarenja

    A-6 Ciklusi

    —— Previše ciklusa ——Optimizirajte broj ciklusa

    P: Koliko DNK uzorka treba dodati u 50 μl PCR reakcijski sistem?
    ytry
    P: Kako pojačati dugačke fragmente?

    Prvi korak je odabir odgovarajuće polimeraze. Obična Taq polimeraza ne može se lektorisati zbog nedostatka 3'-5 'egzonukleazne aktivnosti, a neusklađenost će u velikoj mjeri smanjiti efikasnost produženja fragmenata. Stoga, obična Taq polimeraza ne može učinkovito pojačati ciljane fragmente veće od 5 kb. Taq polimerazu sa posebnom modifikacijom ili drugu polimerazu visoke vjernosti treba odabrati kako bi se poboljšala efikasnost produženja i zadovoljile potrebe pojačanja s dugim fragmentima. Osim toga, pojačavanje dugih fragmenata također zahtijeva odgovarajuće prilagođavanje dizajna prajmera, vrijeme denaturacije, vrijeme produženja, pH pufera itd. Obično prajmeri sa 18-24 bp mogu dovesti do boljeg prinosa. Kako bi se spriječilo oštećenje šablona, ​​vrijeme denaturacije na 94 ° C treba smanjiti na 30 sekundi ili manje po ciklusu, a vrijeme za povećanje temperature na 94 ° C prije pojačanja treba biti manje od 1 minute. Štaviše, postavljanje ekstenzijske temperature na oko 68 ° C i dizajniranje produžetnog vremena prema brzini od 1 kb/min može osigurati efikasno pojačavanje dugih fragmenata.

    P: Kako poboljšati vjernost amplifikacije PCR -a?

    Stopa grešaka amplifikacije PCR -a može se smanjiti upotrebom različitih DNA polimeraza visoke vjernosti. Među svim do sada pronađenim Taq DNK polimerazama, Pfu enzim ima najmanju stopu grešaka i najveću vjernost (vidi priloženu tabelu). Osim odabira enzima, istraživači mogu dodatno smanjiti brzinu mutacije PCR -a optimiziranjem reakcijskih uvjeta, uključujući optimiziranje sastava pufera, koncentraciju termostabilne polimeraze i optimiziranje broja ciklusa PCR -a.

    Ovdje napišite svoju poruku i pošaljite nam je