TIANcombi DNA Lyse & Det PCR komplet

Brzo pročišćavanje DNK iz različitih materijala za PCR detekciju.

TIANcombi DNA Lyse & Det PCR komplet usvaja jedinstveni dizajn pakovanja koji uključuje sve reagense za brzu pripremu genomske DNK i PCR amplifikaciju. Primjenjivo je za jednostepeno pročišćavanje DNK genoma iz različitih uzoraka (biljno tkivo, sjeme, životinjsko tkivo, krv, kvasac i bakterije) i naknadno PCR amplifikaciju i detekciju. Uklanjanje proteina, RNK i drugih sekundarnih metabolita, ekstrakcija organskog otapala, kao ni koraci taloženja etanola nisu potrebni u cijelom procesu pročišćavanja, što operaciju čini jednostavnom i brzom. Kvaliteta proizvoda je stabilna i pouzdana.

2 × Det PCR MasterMix koji dolazi iz ovog kompleta je visoko kompatibilan PCR reagens koji može efikasno i specifično pojačati DNK bez potrebe za uklanjanjem nečistoća poput proteina. Ovaj reagens sadrži Taq DNA polimerazu, dNTPs, MgCl2, pufer, kao i pojačivač, optimizator i stabilizator za PCR reakciju. Primjena reagensa čini PCR reakciju brzom, jednostavnom, osjetljivom, specifičnom i stabilnom. Stoga je ovaj komplet posebno pogodan za skrining velike produktivnosti.

Cat. Ne Veličina pakovanja
4992527 20 µl × 50 rxn
4992528 20 µl × 200 rxn

 

 


Detalji o proizvodu

Eksperimentalni primjer

FAQ

Oznake proizvoda

Karakteristike

■ Jednostavno i brzo: DNK iz različitih tkiva može se izvući za 5 minuta bez potrebe za mljevenjem tekućeg dušika.
■ Široka primjena: Primjenjivo za lišće biljaka, sjeme, životinjsko tkivo, uzorke krvi (svježa krv, antikoagulant, krvni ugrušci, osušene mrlje krvi itd.), Kvasac i bakterije.
■ Snažna kompatibilnost: PCR reagens je pogodan za amplifikaciju DNK ekstrahovane iz različitih izvora uzoraka.

Aplikacije

■ Otkrivanje gena: Idealan izbor za detekciju gena velikih razmjera.

Važne napomene

■ Za uzorke koji sadrže visoku razinu fenola, poput lišća pamuka, ulazna količina uzorka trebala bi biti strogo manja od 0,4 mg, u protivnom će utjecati na PCR reakciju.

Svi proizvodi se mogu prilagoditi za ODM/OEM. Za detalje,kliknite Prilagođena usluga (ODM/OEM)


  • Prethodno:
  • Sljedeći:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Exampl DNK je ekstrahovana iz 5 mg lišća i semena kukuruza, pšenice, pirinča, soje i pamuka. DNA je amplificirana PCR -om pomoću specifičnih prajmera. 6 traka DNK od ukupno 20 μl eluenta je napunjeno po traci.
    1: Genom pozitivne kontrole; 2: ostavite uzorke; 3: uzorci sjemena; 4: NTC; 5: D2000 prajmeri
    Experimental Example M: TIANGEN Marker D2000; 1: Pozitivna kontrola;
    2-7: Broj osušenih mrlja na filter papiru je 1-6; 8: Negativna kontrola.
    Uređaj za bušenje od 3 mm korišten je za uzimanje osušenih mrlja krvi s filtriranog papira kao materijala za ispitivanje ekstrakcije.
    Umetnuto je 6 μl DNK od ukupno 20 μl eluenta po traci.
    Experimental Exampl M: TIANGEN Marker D2000; 1: Pozitivna kontrola (genomska DNK je korištena kao šablon); 2-7: Količina dodane krvi je 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl, odnosno 60 μl; 8-13: Količina dodane krvi je 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl, odnosno 60 μl; 14: NTC.
    6 μl DNK od ukupno 20 μl eluenta naneseno je na agarozni gel.
    P: Nema pojaseva pojačanja

    A-1 Template

    ■ Predložak sadrži proteinske nečistoće ili inhibitore Taq, itd. - Očistite predložak DNK, uklonite proteinske nečistoće ili izvadite DNK šablona kompletima za pročišćavanje.

    ■ Denaturacija šablona nije potpuna —— Odgovarajuće povećati temperaturu denaturacije i produžiti vreme denaturacije.

    ■ Degradacija predloška ——Ponovo pripremite predložak.

    A-2 Primer

    ■ Loš kvalitet prajmera —— Ponovo sintetizujte prajmer.

    ■ Razgradnja prajmera —— Raspodijelite prajmere velike koncentracije u mali volumen radi očuvanja. Izbjegavajte višestruko zamrzavanje i odmrzavanje ili dugotrajno kriokonzerviranje na 4 ° C.

    ■ Nepravilno oblikovanje prajmera (npr. Dužina prajmera nije dovoljna, dimer formiran između prajmera itd.) -Preizmenjivanje prajmera (izbegavanje stvaranja dimera prajmera i sekundarne strukture)

    A-3 Mg2+koncentracija

    ■ Mg2+ koncentracija je preniska —— Pravilno povećajte Mg2+ koncentracija: Optimizirajte Mg2+ koncentracija nizom reakcija od 1 mM do 3 mM sa intervalom od 0,5 mM za određivanje optimalnog Mg2+ koncentracija za svaki predložak i temeljni premaz.

    A-4 Temperatura žarenja

    ■ Visoka temperatura žarenja utiče na vezivanje temeljnog premaza i šablona. ——Smanjite temperaturu žarenja i optimizirajte stanje s gradijentom od 2 ° C.

    A-5 Vreme produženja

    ■ Kratko vreme produženja —— Produžite vreme produženja.

    P: Lažno pozitivan

    Fenomeni: Negativni uzorci također pokazuju trake ciljnih sekvenci.

    A-1 Kontaminacija PCR-om

    ■ Ukrštena kontaminacija ciljane sekvence ili produkata amplifikacije —— Pažljivo ne pipetirajte uzorak koji sadrži ciljnu sekvencu u negativnom uzorku ili ih prosipajte iz epruvete za centrifugu. Reagense ili opremu treba autoklavirati radi uklanjanja postojećih nukleinskih kiselina, a postojanje kontaminacije treba utvrditi eksperimentima s negativnom kontrolom.

    ■ Kontaminacija reagensa —— Rasporedite reagense i čuvajte na niskoj temperaturi.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ koncentracija je preniska —— Pravilno povećajte Mg2+ koncentracija: Optimizirajte Mg2+ koncentracija nizom reakcija od 1 mM do 3 mM sa intervalom od 0,5 mM za određivanje optimalnog Mg2+ koncentracija za svaki predložak i temeljni premaz.

    ■ Nepravilan dizajn prajmera, a ciljna sekvenca ima homologiju sa sekvencom bez cilja. —— Premazi za ponovni dizajn.

    P: Nespecifično pojačanje

    Fenomeni: PCR amplifikacijske trake nisu u skladu s očekivanom veličinom, bilo velike ili male, ili se ponekad javljaju i specifične pojačane pojaseve i nespecifične pojačane pojaseve.

    A-1 Primer

    ■ Loša specifičnost prajmera

    —— Premaz za ponovno oblikovanje.

    ■ Koncentracija prajmera je previsoka —— Pravilno povećajte temperaturu denaturacije i produžite vrijeme denaturacije.

    A-2 Mg2+ koncentracija

    ■ Mg2+ koncentracija je previsoka —— Pravilno smanjite koncentraciju Mg2+: Optimizirajte Mg2+ koncentracija nizom reakcija od 1 mM do 3 mM sa intervalom od 0,5 mM za određivanje optimalnog Mg2+ koncentracija za svaki predložak i temeljni premaz.

    A-3 Termostabilna polimeraza

    ■ Prekomjerna količina enzima —— Smanjite količinu enzima na odgovarajući način u intervalima od 0,5 U.

    A-4 Temperatura žarenja

    ■ Temperatura žarenja je preniska —— Odgovarajuće povećajte temperaturu žarenja ili usvojite dvostepenu metodu žarenja

    A-5 PCR ciklusi

    ■ Previše PCR ciklusa —— Smanjite broj PCR ciklusa.

    P: Zakrpljene ili razmazane trake

    A-1 Primer—— Loša specifičnost ——Projektirajte temeljni premaz, promijenite položaj i dužinu prajmera kako biste poboljšali njegovu specifičnost; ili izvršite ugniježđenu PCR.

    A-2 DNK šablona

    —— Predložak nije čist—— Očistite predložak ili izvucite DNK setovima za pročišćavanje.

    A-3 Mg2+ koncentracija

    ——Mg2+ koncentracija je previsoka —— Pravilno smanjite Mg2+ koncentracija: Optimizirajte Mg2+ koncentracija nizom reakcija od 1 mM do 3 mM sa intervalom od 0,5 mM za određivanje optimalnog Mg2+ koncentracija za svaki predložak i temeljni premaz.

    A-4 dNTP

    —— Koncentracija dNTP -a je previsoka —— Smanjite koncentraciju dNTP -a na odgovarajući način

    A-5 Temperatura žarenja

    —— Preniska temperatura žarenja —— Odgovarajuće povećajte temperaturu žarenja

    A-6 Ciklusi

    —— Previše ciklusa ——Optimizirajte broj ciklusa

    P: Koliko DNK uzorka treba dodati u 50 μl PCR reakcijski sistem?
    ytry
    P: Kako pojačati dugačke fragmente?

    Prvi korak je odabir odgovarajuće polimeraze. Obična Taq polimeraza ne može se lektorisati zbog nedostatka 3'-5 'egzonukleazne aktivnosti, a neusklađenost će u velikoj mjeri smanjiti efikasnost produženja fragmenata. Stoga, obična Taq polimeraza ne može učinkovito pojačati ciljane fragmente veće od 5 kb. Taq polimerazu sa posebnom modifikacijom ili drugu polimerazu visoke vjernosti treba odabrati kako bi se poboljšala efikasnost produženja i zadovoljile potrebe pojačanja s dugim fragmentima. Osim toga, pojačavanje dugih fragmenata također zahtijeva odgovarajuće prilagođavanje dizajna prajmera, vrijeme denaturacije, vrijeme produženja, pH pufera itd. Obično prajmeri sa 18-24 bp mogu dovesti do boljeg prinosa. Kako bi se spriječilo oštećenje šablona, ​​vrijeme denaturacije na 94 ° C treba smanjiti na 30 sekundi ili manje po ciklusu, a vrijeme za povećanje temperature na 94 ° C prije pojačanja treba biti manje od 1 minute. Štaviše, postavljanje ekstenzijske temperature na oko 68 ° C i dizajniranje produžetnog vremena prema brzini od 1 kb/min može osigurati efikasno pojačavanje dugih fragmenata.

    P: Kako poboljšati vjernost amplifikacije PCR -a?

    Stopa grešaka amplifikacije PCR -a može se smanjiti upotrebom različitih DNA polimeraza visoke vjernosti. Među svim do sada pronađenim Taq DNK polimerazama, Pfu enzim ima najmanju stopu grešaka i najveću vjernost (vidi priloženu tabelu). Osim odabira enzima, istraživači mogu dodatno smanjiti brzinu mutacije PCR -a optimiziranjem reakcijskih uvjeta, uključujući optimiziranje sastava pufera, koncentraciju termostabilne polimeraze i optimiziranje broja ciklusa PCR -a.

    Ovdje napišite svoju poruku i pošaljite nam je